摘   要：以济源名优大蒜品种济渎红蒜为研究材料，1/2 MS为基本培养基，研究了济渎红蒜茎尖脱毒快繁技术。研究结果表明，最优的诱导愈伤培养基为1/2 MS+6-BA 1.8 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L+NAA 0.6 mg/L;分化增殖培养基为 

　　　　1/2 MS+6-BA 2.6 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L+NAA 1.5 mg/L;生根培养基为1/2 MS+6-BA 2.2 mg/L+NAA 0.3 mg/L。 

　　关键词：济渎红蒜;茎尖培养;脱毒;快繁 

　　大蒜作为一种特殊蔬菜，不仅含有丰富的维生素、氨基酸、矿质元素等营养成分，而且含有特殊的抗菌、抗癌等活性物质，被认为是重要的天然保健品[1，2]。济渎红蒜是济源市地方特色品种，味道辛辣鲜美、蒜薹短粗肥嫩无梗丝、蒜泥味道长久，其独特的品质深受济源人喜爱。济渎红蒜蒜皮紫红透明、光泽喜人，在清朝时作为贡品，只有皇族才能享用，因此又被称为“济渎金蒜”。近年来，由于病毒病的为害，我国大蒜种性普遍退化、单产降低、品质变劣，一些名优特种大蒜因受病毒病为害几乎濒于绝种[3，4]。本试验以济渎红蒜为材料，以期筛选出适合其脱毒快繁的培养基，建立一套适宜济源市名优大蒜地方品种脱毒快繁的技术。 

　　1   材料与方法 

　　1.1   试验材料 

　　 济渎红蒜，由济源市农科院种植培育。 

　　1.2   试验方法 

　　①剥离茎尖时间的筛选   2014年5月底收获济渎红蒜，从收获初开始，每月进行1～2次茎尖剥离试验。 

　　②外植体处理 选择生长良好的济渎红蒜流水冲洗5 h，用洗洁精冲洗数次后，用手术刀片切除2/3留基部备用。无菌操作下75%酒精消毒35 s→无菌水冲洗1次→0.1%氯化汞灭菌10 min→ 

　　无菌水冲洗8 次进行材料表面灭菌。然后用无菌滤纸吸干水分，在显微镜下剥离茎尖，茎尖长度为0.2～0.6 mm， 以备接种。 

　　③愈伤组织诱导培养基配方的筛选   以1/2 MS培养基为基础培养基，设6-BA、2，4-D、NAA 3个因素，每个因素3个水平，详见表1，共9个处理，详见表2，每处理3次重复。培养基pH值6.0、蔗糖浓度为30%、琼脂粉含量3 g/L。将剥离好的茎尖接种在不同培养基上，散射光光照强度2 000～3 000 lx、温度（25±2）℃、光照时间12 h/d进行培养。 

　　④分化增殖培养基的筛选   以1/2 MS培养基为基础培养基，加入不同浓度的6-BA、NAA、 

　　2，4-D，共6个处理，详见表3，每处理4次重复;培养基pH值6.0、蔗糖浓度30%、琼脂粉含量3 g/L。将诱导的愈伤组织接种在不同培养基上，培养条件同③。 

　　⑤生根培养基的筛选和移栽   以1/2 MS培养基为基础培养基，加入不同浓度6-BA、NAA，详见表4，共4个处理;将增殖济渎红蒜苗接种于生根培养基上，观察生根情况;培养条件同③。将生根后的脱毒苗，移栽到已灭菌的草炭∶蛭石=2∶1的穴盘中。移栽后覆盖遮阳网防晒、防虫网防蚜虫。 

　　⑥大蒜内病毒的检测   将剥离的大蒜茎尖培养2个月后，取部分愈伤或小苗捣碎、研磨，制成组织汁液，用磷酸盐缓冲液在3 000 r/min离心20 min后，在电镜下观察，并以未脱毒的样品作对照，确认含病毒的基本形态和特征。 

　　2   结果与分析 

　　2.1   不同时间对济渎红蒜茎尖剥离的影响 

　　根据每月剥离的情况发现，每年的5月底到翌年2月底，茎尖容易剥离，并且8～10月剥离的茎尖诱导成活率高于其他时间。因为初期剥离的茎尖，茎尖含水量大，剥离过程中易破碎;而后期，茎尖较小，不易剥离。 

　　2.2   济渎红蒜愈伤组织诱导培养基的筛选 

　　为了促进茎尖成活以及分化，需选择合适的激素配比。试验观察发现，如果在接种后14 d，茎尖出现透明状，说明在诱导愈伤过程中出现玻璃化现象，且培养基湿度大;接种20 d后，茎尖泛绿色，并且膨大，说明开始诱导愈伤。正常的愈伤组织是黄绿色，且结构较为紧密，这种愈伤组织分生能力强，芽点较多;若为深绿色，则太硬不易分化，且最后容易转变为浅黄色而死亡。由表2可知，1/2 MS+6-BA 1.5 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L+NAA 0.8 mg/L的培养基愈伤组织诱导率较高，但愈伤组织呈浅黄色，不分化、不成块，在培养过程中逐渐玻璃化死亡。因此，最佳的诱导培养基为1/2 MS+6-BA 1.8 mg/L+2，4-D 0.2 mg/L+NAA 0.6 mg/L。 

　　2.3   济渎红蒜分化增殖培养基的筛选 

　　选择较好的愈伤组织进行分化增殖培养，在激素浓度较高的条件下，诱导增殖率会降低，主要表现为形成畸形苗、叶片较长，芽尖生长较慢;有些会出现芽点较多、较绿，而分化比较少的情况。从表3可以看出，1/2 MS+6-BA 2.6 mg/L+2，4-D 0.3 mg/L+NAA 1.5 mg/L，增殖系数可达4倍，出苗比较整齐，分化苗生长比较健壮。 

　　2.4   济渎红蒜生根培养基的筛选 

　　从表4可以看出，1/2 MS+6-BA 2.2 mg/L+NAA 0.3 mg/L，生根效果最好。6-BA浓度为2.2 mg/L的培养基中，生根少且较慢，出现根部膨大的现象，影响移栽成活率。 

　　2.5   病毒检测结果 

　　随机取再生大蒜幼苗50株，用未经脱毒的大蒜幼苗作对照，进行检测。结果发现，对照100%含病毒，且病毒含量很高;而再生的大蒜幼苗有68%不含病毒，即脱去病毒;15%的病毒含量高，但仍低于对照。说明茎尖剥离脱毒可降低病毒含量。 

　　3   讨论与结论 

　　 有资料显示，切取蒜瓣内幼芽的茎尖分生组织，经组织培养获得脱毒苗是解决大蒜品种退化、提高大蒜产量和质量的有效途径[5～7]。茎尖剥离过程中，其大小直接影响脱毒效果及成活率。试验中发现，0.3～0.5 mm长的茎尖有利于提高成活率并且脱毒效果比较明显;虽然0.1～0.2 mm的茎尖脱毒效果最好，但是接种后成活率不高;而茎尖长度低于0.4 mm时，诱导愈伤时玻璃化现象严重，原因有待进一步分析。但在脱毒过程中，完全脱毒的成功率还不是很高，下一步需要改进脱毒方法。