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3.2 HDA的操作程序
HDA的操作程序有两种做法：两步法和一步法。两步法：混合物A放在95℃水浴加热2分钟；然后在64℃水浴中3分钟退火；加入与混合物A等体积的混合物B，置于60～65℃水浴锅中反应75～90分钟，加入终止反应液结束反应。
一步法：操作过程比两步法更简单，省去两步法中的第一步，等体积混合混合A、混合物B，放在65℃的水浴锅中进行扩增。
4 HDA技术的优缺点
4.1 HDA的优点
和其他的等温基因扩增技术比较，HDA技术更加的简便、高效、快速，是一种正真做到在恒温下进行反应的扩增技术。HDA扩增的反应时间75～90分钟，整个反应在恒温下进行，只需要恒温水浴锅这一简单仪器，与其他基因扩增技术相比，适用于基层实验室对疾病的快速检测与诊断。HDA反应除去了5′～3′外切酶活性的BstDNA聚合酶，该操作不容易产生非特异性的扩增，增加反应的敏感性。
4.2 HDA的缺点
HDA是近几年新发明的一种等温基因扩增技术，研究者较少，且发展还不够成熟，目前还没有在基因扩增等方面的应用。
5 应用与展望
与其他技术相比，HDA技术简便、高效、快速，适用性广泛，在实时定量方法、凝胶电泳和ELISA实验中都可应用，同时适用于基层实验室对疾病的快速检测与诊断。已有研究通过对HDA体系的优化，成功建立了RT-tHDA检测方法。有研究表明，HDA能够扩增cDNA、微生物基因组DNA等基因片段，因其具有简便性、高效性、快速性等优点，该方法具有广阔的研究和发展前景。因为HDA的反应是完全在恒温下进行，特别适用于基层实验室，随着HDA这种等温扩增技术的快速发展，会有专门适于HDA操作的简单仪器出现。
HDA技术是模拟动物体内DNA的合成方式，具有高保真性和高敏感性。2006年New Englang Bio-labs在HDA的原有的基础上又发明了一种新的检测方法，即环HDA法，该方法不但可扩增大分子DNA片段，还可直接扩增完整的cDNA。该方法的发现为分子生物学再一次提供新的科研手段。该方法使基因的扩增和基因的筛选同时完成，分析和构建质粒DNA的时间逐步减少，更加有效的加快了反应的速度并且提高了DNA的产量。cHDA法利用T7基因4蛋白使反应温度仅在25℃反应，因此在室温条件下即可完成扩增，不需要加热，操作更加简单方便。
目前已经有对腹泻性梭状芽胞杆菌用HDA方法检测的报道。但HDA这种新型的等温扩增技术受DNA解旋酶结合、延伸长度和解旋速度影响，模板靶序列超过400bp会显著降低扩增效率，DNA解旋酶对扩增效果影响很大，今后的研究重点将是如何筛选出优质的DNA解旋酶。
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